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Oligo(dT)磁珠的介紹

2025-09-14 [41]

Oligo(dT)磁珠是一種表面共價修飾了寡聚脫氧胸苷酸(Oligo(dT))序列的磁性聚合物微球,其核心特性與生物活性應(yīng)用可歸納如下:

一、核心特性

  1. 表面功能化

    • 磁珠表面偶聯(lián)了由多個脫氧胸腺嘧啶核苷酸(dT)組成的寡核苷酸序列,能夠特異性地與真核生物mRNA的3'端多聚腺苷酸(Poly A)尾端通過堿基互補(bǔ)配對結(jié)合。

  2. 磁響應(yīng)性

    • 磁珠具有超順磁性,可在磁場作用下快速分離,移除磁場后無剩磁,便于操作和回收。

  3. 粒徑與分散性

    • 常見粒徑包括1μm等,具有單分散性,懸浮性好,沉降速率低,適用于自動化操作。

  4. 化學(xué)穩(wěn)定性

    • 在多種緩沖液(如PEG、NaCl、硫氰酸胍等)中穩(wěn)定,適應(yīng)不同核酸提取體系。

二、生物活性應(yīng)用

  1. mRNA純化

    • 高效分離:Oligo(dT)磁珠能夠快速、高效地從真核生物的總RNA、細(xì)胞裂解物或帶有Poly A的體外轉(zhuǎn)錄RNA樣本中分離出完整且高純度的mRNA。

    • 高特異性:通過堿基互補(bǔ)配對原理,磁珠與mRNA的Poly A尾結(jié)合具有高特異性,能夠有效避免非特異性RNA(如rRNA、tRNA)的污染。

    • 操作簡便:純化過程通常包括磁珠預(yù)處理、樣本結(jié)合、洗滌和洗脫等步驟,所有操作均可在單管中完成,無需離心或復(fù)雜設(shè)備。

  2. 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

    • RT-PCR:純化的mRNA可直接用于逆轉(zhuǎn)錄PCR,生成cDNA用于后續(xù)分析。

    • cDNA文庫構(gòu)建:磁珠純化的mRNA是構(gòu)建高質(zhì)量cDNA文庫的理想模板,適用于高通量測序(NGS)等實(shí)驗(yàn)。

    • RACE與探針雜交:磁珠純化的mRNA可用于快速擴(kuò)增cDNA末端(RACE)實(shí)驗(yàn),或與特異性探針雜交進(jìn)行基因表達(dá)分析。

    • 轉(zhuǎn)錄組測序:磁珠純化的mRNA可直接用于轉(zhuǎn)錄組測序,揭示基因表達(dá)譜和調(diào)控機(jī)制。

  3. mRNA疫苗與藥物研究

    • 疫苗開發(fā):磁珠純化的mRNA可用于編碼抗原蛋白的疫苗制備,具有高效、安全等優(yōu)勢。

    • 藥物篩選:通過磁珠純化mRNA,可篩選與之相互作用的分子(如蛋白質(zhì)、小分子化合物),加速藥物研發(fā)進(jìn)程。

三、操作優(yōu)勢

  1. 簡化流程:無需離心或復(fù)雜設(shè)備,通過磁場快速分離,減少操作時間和樣本損失。

  2. 兼容性:適配多種緩沖液體系,可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整磁珠用量和洗滌條件。

  3. 穩(wěn)定性:磁珠在4℃保存條件下穩(wěn)定性高,避免冷凍及離心操作,維持分散穩(wěn)定性。

  4. 高通量適用性:磁珠法易于自動化和規(guī)模化操作,適用于高通量mRNA純化需求。

四、注意事項(xiàng)

  1. RNase污染控制:實(shí)驗(yàn)操作的所有器具和試劑需防止RNase污染,確保mRNA完整性。

  2. 磁珠用量優(yōu)化:磁珠用量需根據(jù)樣本量調(diào)整,避免用量過低導(dǎo)致mRNA回收率低或rRNA殘留過高。

  3. 洗脫條件優(yōu)化:洗脫時需控制溫度和時間,以提高洗脫效率并減少磁珠殘留。

  4. 樣本質(zhì)量:若總RNA樣本降解嚴(yán)重,可能影響mRNA純化效果,需確保樣本質(zhì)量。

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