新藤黃酸-牛血清白蛋白偶聯物的制備方法主要有以下幾種：

碳二亞胺法（EDC/NHS）

• 原理：碳二亞胺（EDC）可活化新藤黃酸的羧基，形成活潑的中間體，再與牛血清白蛋白（BSA）的氨基反應，形成穩定的酰胺鍵，從而實現偶聯。

• 步驟：

• 將新藤黃酸和牛血清白蛋白分別溶解在適當的緩沖液中，如PBS（pH 7.4）。

• 向新藤黃酸溶液中加入EDC和NHS，室溫下攪拌反應一段時間，使新藤黃酸的羧基活化。

• 將活化后的新藤黃酸溶液緩慢滴加到牛血清白蛋白溶液中，室溫下繼續攪拌反應數小時至過夜。

• 反應結束后，通過透析或超濾等方法去除未反應的小分子物質，得到純化的新藤黃酸-牛血清白蛋白偶聯物。

戊二醛法

• 原理：戊二醛具有兩個醛基，可與新藤黃酸和牛血清白蛋白的氨基分別反應，形成席夫堿，從而將兩者偶聯在一起。

• 步驟：

• 將新藤黃酸和牛血清白蛋白分別溶解在適當的緩沖液中。

• 向新藤黃酸溶液中加入適量的戊二醛溶液，室溫下攪拌反應一段時間。

• 將牛血清白蛋白溶液加入到上述反應體系中，繼續攪拌反應數小時。

• 反應結束后，通過透析或超濾等方法去除未反應的戊二醛和其他小分子雜質，得到新藤黃酸-牛血清白蛋白偶聯物。

其他方法

• 點擊化學法：利用點擊化學反應，如疊氮-炔烴環加成反應等，將含有特定官能團的新藤黃酸衍生物與牛血清白蛋白進行偶聯。

• 酶促偶聯法：利用特定的酶催化新藤黃酸與牛血清白蛋白之間的反應，實現兩者的偶聯。

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