蛋白A磁珠的介紹


蛋白A磁珠是一種基于蛋白A與免疫球蛋白Fc段特異性結(jié)合原理設(shè)計的磁性微粒,廣泛應(yīng)用于抗體純化、免疫沉淀(IP)、共免疫沉淀(Co-IP)等生物化學(xué)和分子生物學(xué)研究領(lǐng)域。以下是對蛋白A磁珠的詳細介紹:
一、基本原理
蛋白A磁珠的核心成分是重組蛋白A,它能夠特異性地結(jié)合多數(shù)哺乳動物IgG的Fc端(如小鼠、人、兔、豬、犬和貓等)。每個蛋白A分子可結(jié)合多個IgG分子(通常為5個),從而實現(xiàn)對抗體的高效捕獲和純化。磁珠本身具有超順磁性,在外磁場作用下可快速分離,撤去磁場后易于分散,便于實驗操作。
二、物理特性
粒徑:通常為納米級(如200nm)或微米級(如1μm),具體取決于產(chǎn)品設(shè)計和應(yīng)用需求。
比表面積:納米級磁珠具有超大比表面積,便于快速結(jié)合抗體或抗體復(fù)合物。
磁響應(yīng)性:超順磁性設(shè)計確保磁珠在外磁場作用下快速分離,且撤去磁場后無剩磁,易于分散。
三、核心優(yōu)勢
高容量:結(jié)合容量高,每次實驗的樣品用量更少。
低非特異性結(jié)合:穩(wěn)定的預(yù)封閉磁珠設(shè)計可減少非特異性吸附,提供高純度的產(chǎn)物。例如,在免疫沉淀實驗中,洗脫的抗原中不含來自復(fù)雜細胞裂解物的污染性蛋白。
高效分離:磁珠可消除樹脂損耗,與僅使用離心管的傳統(tǒng)IP方法相比,分離效率更高。
兼容性:兼容手動和自動化操作(如Thermo Scientific KingFisher儀器),適用于高通量工作流程。
四、主要應(yīng)用
抗體純化:從血清、細胞培養(yǎng)物上清液或腹水中純化抗體。
免疫沉淀(IP):捕獲細胞或組織提取物中的抗原-抗體復(fù)合物。
共免疫沉淀(Co-IP):研究蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)。
其他應(yīng)用:如抗原表位分析、蛋白質(zhì)復(fù)合物純化等。
五、注意事項
避免離心:離心可能導(dǎo)致磁珠聚集,降低結(jié)合能力。
避免干燥:磁珠干燥可能導(dǎo)致不可逆的損傷,影響實驗結(jié)果。
儲存條件:通常建議在2-8℃下儲存,避免冷凍。
單次使用:多數(shù)蛋白A磁珠設(shè)計為單次使用,重復(fù)使用可能影響實驗結(jié)果。
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